|
氢谱碳谱|
DEPT与APT|
基本二维谱|
进阶二维谱|
进阶核磁谱|
杂核检测|
变温|
VnmrJ|
|
Basic 2D 检测操作
(Varian NMR / Vnmr6.1c)
gCOSY/
NOESY/ gHSQC/
gHMBC/ gHETCOR
-----------------------------------------
gCOSY
检测
|
gCOSY |
gradient Correlation Spectroscopy |
|
目的 |
2D谱,
做
H-H 近程相关 |
|
参考 |
1. 环球技术人员:
胡冰,
金朝鼎.
2. 操作手册:
Console Acceptance Tests & Specification, page 55.
Guide to NMR Experiments
3. 其他应用人员:
贺文义
(药物所),
颜贤忠
(军科院),
冯锐
(港大) |
|
标样 |
2-Ethyl-1-indanone (2%) in CDCl3 |
|
检测操作 |
|
|
准备 |
做好 H
谱于 1
区
(或调出以前的氢谱) |
|
移谱与组合 |
mf(1,6), jexp6, wft
两红线定位,
<Expand>, movesw, ds,
再标定某峰 (nl, <ref>)
gCOSY |
|
检查关键参数 |
查最新 update
值:
pw=9.2 |
|
检查一般参数 |
ss=4, tpwr=60
proc1='n' (数字
1) |
|
测试 |
nt=16, ni=128, time, go, 命名
text('xxx\\yyy') |
|
处理图谱 |
svf 存谱,
(wft, wti, 调整,
wft1da, 选左边某清楚线条,
wti, 调整)
wft2da, foldt, dconi, dpcon(20,1.2)
调色度
(浅色
2 格,
<vs+20%> 或
<vs-20%>)
标定
(十字红线,
rl(7.24p), rl1(7.24p)) |
|
打印 |
plcosy(15, 1.2, 1) |
|
说明 |
|
|
红线定位 |
两红线定范围时,
两端最好留
1 ppm 以上,
防止信号折叠或谱图太靠边. |
|
再标定 |
1. movesw 后再标定某峰:
预防
2D 对应的峰跑位.
输入
ds 可以看到移位!
2. 主要用于打印时插入上面与左面的氢图
(2D 的圆点与
1D 的
H 峰对应). |
|
mf(1,6) |
1. 将
1 区氢谱以及参数移到
6 区,
准备在
6 区做
gCOSY 谱,
1 区保留
H 谱画图用.
2. 习惯:
6 区
(cosy), 7 区
(noesy), 8 区
(hsqc), 9 区
(hmbc) |
|
pw |
1. 使用最新
pw 值,
为
2D 成败的关键参数.
2. 查此值:
i. 自桌上的最新操作讲义;
或自网页
ftp 下载的最新资料
ii.
自
[Setup EXP] / 右下方
Probe Administration 的
<Proton> 查最新值
3.
改日培训
pw 测定,
可以自己设定最新且符合样品的
pw 值. |
|
spin='n' |
1. 所有
2D 图检测都不能
spin, 切记!.
2. 已经自动设置好
spin=0, 略检查
(spin='n' 即
spin=0). |
取消线性预测
proc1='n' |
0. proc1 为数字
1.
1. 取消线性预测二法:
i. proc1='n' 表
不要线性预测.
ii. [Process] /
点消
Processing F1 的
<Linear Prediction>
2. 同核去耦
(cosy, noesy, tocsy)
可以不必线性预测.
否则:
可能出现
strtext1, lpfilt1 too large
等警告.
3. 此指令可以处理谱图前输入,
即检测测之前或之后输入皆可.
不影响检测.
4. 线性预测长用于
HMBC 时,
对于
ni=256, 经线性预测后,
可预测到
1-4 倍清晰度. |
|
nt/ni 考虑 |
1. 所花时间
为:
nt*ni*(d1+at) (例如:
16*128*(1+0.18) 秒次
~ 50 min)
2. nt: 可为任意值,
梯度场
(gCOSY) 不必
4 的倍数,
此值高有利于信噪比.
3. ni: 表分辨率,
可为任意值,
但最好能在
128 以上.
ni 值太小时,
可能出现长线条;
ni 大促成圆点.
(药物所建议提高
ni. 而
nt < 4 亦可)
4. 若样品浓度高:
nt 可小些,
ni 大些.
5. 若信号峰本身分离不错
(即分辨率高),
ni 可小些.
6. 扫描过程可随时检查谱图,
满意后随时可停,
即
ni 到某值时.
7. gCOSY 谱图快,
nt=8, ni=64 (约
11 min).
更浓时:
nt=2, ni=32 (约
3 min). |
|
wc / wc2 |
0. wc: 图的长度;
wc2: 图的高度.
由
wc? wc2? 检查数值.
1. 建议值:
wc=150, wc2=150. (或
wc=100, 170, wc2=110).
2. 若没调好,
可能出现
"no room to display COSY connection table"
3. 此图并非长方形,
因为
wysiwyg='n'
(what you see is what you get
所见即所得) |
|
sc / sc2 |
sc: 全图水平位移;
sc2: 全图上下位移
一般设定:
sc=0, sc2=0 |
|
sb |
1. 相位窗函数:
sb=-at/2, sb1=-ni/(2*sw1)
2. 约略数值:
sb=0.092, sb1=-0.036
3. 利用
wti 调整 |
窗函数
sb / sb1 |
1. 相位窗函数:
sb=-at/2, sb1=-ni/(2*sw1)
2. 约略数值:
sb=0.092, sb1=-0.036
其中
sb1 可正可负,
负号仅为代号,
表
sine bell 的平方值,
较佳.
3. wti 人工调法:
见下述 |
|
wti 调整 |
操作: wft, wti,
调整,
wft1da, 选左边某清楚线条,
wti, 调整
过程中: wti
后出现三部分图,
先略调上图,
再中键点击最下的
df 信号图,
拉动中间
sine bell 图约和下面的
df 信号一样宽 |
|
wft2da |
1. 即二维的
wft 自动设定
2. 也可用自动:
<Main Menu>, <Autoprocess> |
|
foldt |
1. 含义:
折叠,
保留对称的信号点,
其它非对称的折叠点视为噪音清除掉.
2. 只用于:
cosy, noesy 等对称型谱图
(两维皆
H 谱)
处理
hsqc, hmbc 时不能输入此值
3. 有专家建议:
尽量不用此指令,
以防强弱不等的信号被删除造成误判. |
|
dconi |
相当于 1D
的
ds, 处理
2D 时随时输入看谱图. |
|
dpcon |
1. dpcon(20, 1.2): 看等高线密集度,
20 圈,
间隔
1.2 单位
可自行选择其它值,
例如:
dpcon(10, 1.2)
2. 视个人喜好,
可以不使用此指令. |
|
调色度 |
1. vs: 峰的高低.
若点击
(右键)
在信号点上,
相当于峰高放大或缩小.
2. 色带:
相当于
th, 峰的等高线门槛.
3. 建议:
让右边颜色变最浅或保留
2 格,
调
vs (或
<vs+20%>) 使信号点清楚. |
|
标定 |
1. 十字红线对齐已知点
(如
CHCl3:
rl(7.24p), rl1(7.24p))
2. 另种输入法
(万无一失法):
rl(2172), rl1(2172),
换算成频率输入. (2172 = 7.24 x
300)
3. 定义:
rl 表
F2 轴
(~Y 轴),
rl1 表
F1 轴
(~X 轴);
d 表
decoupling |
|
打印选择 |
1. 简洁:
plcosy
2. 完整:
plcosy(20,1.2,1)
表:20
ring (即自山峰高处切下
20 层);
每
ring 1.2 unit; H谱图在第1工作区
3.
也可:
pl page |
|
备注 |
|
|
gCOSY |
1. g 表
"梯度"
gradient; Varian 仪器特色,
检测灵敏快速.
2. 大写
gCOSY 为新版本,
若小写
cosy 为旧版本. |
|
列上-左H
谱 |
1. <Main Menu>, <Display>, <Contour>, <Proj>, <Hproj(max)>,
<Vproj(max)>
2. 此投影图只供参考,
和打印的对位谱无关. |
|
关联图 |
<Main Menu>, <Analyze>, <COSY>, <2D Line List>,
<Find Correlation>,
<Plot Correlation>, <All Contour>, <Page>
其它:
考虑
<All Params>, <Pos Only> |
|
去关联干扰图 |
* 在画相关图若不慎得杂
number 或
box 于图,
去除法:
<Main Menu>, <Contour>, <Display>, <Peak>,
<Display>, <Hd Num>, <Hd Box>. |
|
检测过程 |
1. 尽量不要看谱或处理谱图,
因可能出现干扰,
功亏一篑.
2. 看谱检查
ni 是否已可以,
由
<Main Menu>, <Autoprocess> |
|
存谱 svf |
1. 建议处理
2D 谱图前先存谱,
预防操作不当返不回原谱.
2. 快捷法:
先转移到其它工作区暂存处理:
mf(6,3) |
|
英文 |
|
|
全名 |
mf = move fid; sb = sine bell;
d1 = relaxation delay; d2 = evolution delay
proc1 = processing F1,
wysiwyg = WhatYouSeeIsWhatYouGet (所见即所得)
dconi = display contour of interaction
rl: reference line; p = ppm; d = decoupling
Hd Num = hide number |
NOESY 检测
|
参数 |
大多数参数含义见 gCOSY
所述. |
|
mix |
1. 小分子:
MW < 500, mix=0.8
2. 大分子:
mix 可
2.0 |
|
fn |
fn 影响内存,
不影响时间.
对
200 兆,
fn=1024; 300 兆,
fn=2048 |
|
处理 |
NOESY 为相敏,
可选择
<Display> <phase>. |
|
nt/ni |
nt=16n (16 的倍数,
否则尾峰消不掉),
ni=128 或任意值,
ni 值大信号点较圆.
合理选择:
nt=16, ni=128 (下一选择
nt=16, ni=256 好). |
|
dconi('dpcon') |
dconi('dpcon', 15, 1.3)
颜色:
正信号:
黄
~ 白色;
负信号:
蓝
~ 深蓝 |
|
其它打印 |
1. plcosy(15, 1.2, 1): 标准打印.
2. plcosy: 简单打印,
不带旁氢谱,
不画圈.
3. plcosy('pos',20,1.5,1):
打印白色点,
主点
当对角线峰太强干扰时.
4. plcosy('neg',20,1.5,1):
打印蓝色点.
此为干扰信号. |
|
备注 |
|
|
关联图 |
同 cosy
的处理法 |
|
NOESY |
1. 大写
NOESY 为新版本,
小写
noesy 为旧版本.
2. 无
gNOESY, 300 兆对
NOESY 时间无大帮助.
3. NOESY 在目前
2D 中花时间最久,
数个小时.
4. 推荐优先考虑检测一维
noe. |
gHSQC 检测
|
gHSQC |
gradient
Heteronuclear
Single
Quantum
Coherence |
|
目的 |
2D 谱,
做
H-C 近程相关 |
|
参考 |
1. 环球技术人员:
胡冰,
金朝鼎.
2. 操作手册:
Console Acceptance Tests & Specification, page 55.
Guide to NMR Experiments;
3. 其他人员:
贺文义
(药物所),
颜贤忠
(军科院),
冯锐
(港大) |
|
检测操作 |
|
|
准备 |
事先做好 H, C
谱,
分别置于
1, 2 区 |
|
定 C
位置 |
mf(2, 3), jexp3, 两红线
190~10, <Expand>, movesw, ds,
标定某峰
抄录新的
sw 及
tof 值
(巧妙法:
打
sw1=碳谱
sw, dof=碳谱tof,
见下述) |
|
定 H
位置 |
jexp1, 调出
H 谱
(以前检测处理好的谱图). |
|
调谱与组合 |
mf(1,8), jexp8, 两红线,
<Expand>, movesw, ds,
再标定某峰.
gHSQC
混合:
改
sw1= (3区C
的sw),
dof = (3区C
的
tof) (巧妙法:
由快捷键调出) |
|
检查关键参数 |
pw=9.2 (查最新
update 值),
j1xh=140 (视情况) |
|
检查一般参数 |
pwx=11.5, pwxlvl=60 (查最新
update 值)
选择值: ss=32
proc1='n' (数字
1) |
|
测试 |
nt=8, ni=256, time, go
命名
text('xxx\\yyy') |
|
处理图谱 |
svf 存谱
[Display] <Power>
wft2da (若出现
Scale outside boundaries:
输入
wc=150, wc2=150)
dconi, dpcon(20,1.2)
调色度
(浅色
2 格,<vs+20%>
或
<vs-20%>)
标定
(十字红线,
nl, rl(4.2p), rl1(61d)) |
|
打印 |
plhxcor(20,1.2,1,2) |
|
说明 |
|
|
mf(1,8) |
1. HSQC 以
H为主
(检测
H), 所以移动
H 谱参数,
再混和其它.
2. 习惯上第
8 区检测
HSQC |
|
C-H 近程 |
指 1
键距离,
即得到那个
H 踏在那个
C 上. |
|
改 sw1, dof
法 |
1. 巧妙法:
在
3 区输入
sw1=xxx (原C的
sw), dof=yyy (原C的tof)
仪器将出现错误
beep 声,
以后用快捷键套入.
2. 记录在纸上
(原
3 区C谱的
sw, tof 数值)
3. 输入sw?
tof? 等,
之后由信息窗口回看. |
|
pw / pwx 参数 |
1. pw 找
update 的
pw90 值,
为最关键参数.
2. 选用合乎此值的最新
H, C 一维谱,
则完全一样.
3. 隶属:
pw (H), pwx (C), pplvl (C).
查时由
[Setup EXP] 右下
Porbe 的
<Proton> or <Carbon> |
|
j1xh 考虑 |
j1xh: 对
aliphatic 120, aromatic 160,
一般未知
140 |
|
nt/ni 考虑 |
nt 决定
S/N，ni
决定
C 维的分辨率
nt, ni 可任意值
合理选择:
一般:
nt=8, ni=256
快速型:
nt=8, ni=128 (约
45 min)
更浓时:
nt=4, ni=32 (约
4 min) |
|
信号点强度处理 |
1. <absval>: 即
absolute value, 其信号较强.
2. <power>: 其点较圆,
可考虑用此.
3. 可以为
<phased>, HSQC 相敏. |
|
打印 |
1. plhxcor(20,1.2,1,2) 含义:
20 ring, 间距
1.2, 1 区H谱,
2 区
C 谱
2. plhxcor(10,1.5,1,3)
含义: 10 ring,
间距
1.5, 1 区H谱,
3 区
C 谱 |
|
备注 |
|
|
gHSQC |
1. g 表梯度场
(gradient), 速度快.
2. 大写
HSQC 为新版本,
打小写
hsqc 为旧版本
3.
属于反相实验
(检测
H), 速度较快
(检测灵敏度高的
H). |
|
比较 HETCOR |
1. HSQC: 反相实验,
检测H.
调
H 谱为底,
入
C 的
sw, tof.
2. HETCOR: 正相使用,
检测
C. 调
C 谱为底,
入
H 的
sw, tof. |
|
比较 gHMBC |
1. gHSQC: 为相敏,
做
2 相循环
(打
da 出现
2 组).
2. gHMBC: 灵敏度较差,
应比
gHSQC 做久些.
最低
ni=128. |
|
同夜测 C
谱 |
0. 以上所述为已经得到
C 谱的
2D 检测.
1. 尚未得到清晰的
C 谱也可同时和
gHSQC 一起检测
2.
检测法,
见另页讲义 |
|
sine bell |
可考虑: sb=-at, sb1=-ni/sw1, sbs=sb,
sbs1=sb1 |
|
参数含义 |
pw: H 的
90 度脉冲
pwx: C
的
pwx
pwxlvl: C 的
pwxlvl |
|
英文 |
|
|
全名 |
ss = steady state; plhxcor: plot h-x correlation; |
gHMBC 检测
|
gHMBC |
gradient
Heteronuclear
Multi-Bond
Correlation |
|
目的 |
2D谱,
做
C-H 远程相关 |
|
参考 |
1. 环球技术人员:
胡冰,
金朝鼎.
2. 操作手册:
Console Acceptance Tests & Specification, page 55.
Guide to NMR Experiments.
3. 其他人员:
贺文义
(药物所),
颜贤忠
(军科院),
冯锐
(港大) |
|
检测操作 |
|
|
准备 |
事先做好 H, C
谱,
分别置于
1, 2 区 |
|
定 C
位置 |
mf(3), jexp3, 两红线
190~10, movesw, ds,
再标定某峰.
抄录新的
sw 及
tof 值
(方便法:
打
tof? sw?) |
|
定 H
位置 |
jexp1, 调出
H 谱
(以前检测处理好的谱图). |
|
调谱与组合 |
mf(1,9), jexp9, 两红线,
<Expand>, movesw, ds,
再标定某峰
(nl, ref)
gHMBC
混合:
改
sw1= (3 区C
的sw),
dof = (3 区C
的
tof) |
|
检查关键参数 |
查最新值: pw=9.2,
判断值:
j1xh=120 (烷烃),
jnxh=6 (2-3 键) |
|
检查其它参数 |
pwx=11.5, pwxlvl=60, ss=32, proc1='n' (数字
1) |
|
测试 |
nt=16, ni=128, time, go
命名
text('xxx\\yyy') |
|
处理图谱 |
svf 存谱
线性预测: <Display>
<Absolute>
wft2da (若出现
Scale outside boundaries:
输入
wc=150, wc2=150)
dconi, dpcon(20,1.2)
调色度
(浅色
2 格,
<vs+20%> 或
<vs-20%>)
标定
(十字红线,
nl, rl(1.21p), rl1(16.81d)) |
|
打印 |
plhxcor(20,1.2,1,2) |
|
说明 |
|
|
其它参数 |
参考 gHSQC
说明 |
|
mf(1,9) |
1. HMBC 以
H为主
(检测
H), 所以移动
H 谱参数,
再混和其它.
2. 习惯上第
9 区检测
HMBC |
|
jnxh 考虑 |
j1xh: 对
aliphatic 120, aromatic 160,
一般未知
140
jnxh: 3-8 Hz. 数值愈小,
测键远,
效果较差.
6 Hz 相当于
2-3 键,
有共振时达
4-5 键. |
|
nt/ni 考虑 |
nt: nt 大有利灵敏度
(信噪比).
gHMBC 的
nt 比
gHSQC 大些.
ni: 128 或任意.
(最低
ni=64, 建议
128 以上,
否则信号容易变长)
* 其它选择:
快速型
nt=8, ni=128, 约
25 min |
|
信号点强度 |
1. <absval>: 即
absolute value, 其信号较强.
2. <power>: 其点较圆,
可考虑用此.
3. 不可以为
<phased>, 因
HMBC 非相敏. |
|
proc1='y' |
后处理可以考虑进行线性预测,
可以加强
ni, 使其强度增加
1-4 倍. |
|
备注 |
|
|
gHMBC |
1. g 表梯度场
(gradient), 速度快.
2. 大写
HMBC 为新版本,
打小写
hmbc 为旧版本
3.
属于反相实验
(观察C检测H),
速度较快
(检测灵敏度高的
H).
4. 比较正相实验,
名为
COLOC (C,H Correlation via Long-Range Couplings) |
gHETCOR 检测
|
gHETCOR
全名 |
gradent Heteronuclear Correlation |
|
目的 |
2D谱,
做
C-H 近程相关,
正相检测 |
|
参考 |
1. 环球技术人员:
翟纯,
艾选军
2.
操作手册:
Guide to NMR Experiment, p.51.
3. 其他人员:
冯锐
(清华),
贺文义
(药物所). |
|
检测操作 |
|
|
准备 |
事先做好 H, C
谱,
分别置于
1, 2 区 |
|
定 H
位置 |
mf(1,3), jexp3, wft,
两红线范围,
<Expand>, movesw, ds,
标定某峰
抄录新的
sw 及
tof 值
(巧妙法:
sw1=xxx, dof=yyy, 发出
B 声) |
|
定 C
位置 |
jexp2, 调出C谱 |
|
调参考谱与组合 |
mf(2,8), jexp8, wft, 两红线范围,
<Expand>, movesw, ds,
标定某峰
gHETCOR
混合:
改
sw1= (3区H之sw值),
dof = (3区H之tof
值).(巧妙法:
由快捷键调出) |
|
检查关键参数 |
查update
值:
pw=9.2,
tpwr=63
j1xh=140 (视情况) |
|
检查一般参数 |
pwx=11.5, pwxlvl=60 (查最新
update 值)
选择值:
ss=32
proc1='n' (数字
1) |
|
测试 |
nt=16, ni=128, time, go
命名
text('xxx\\yyy') |
|
处理图谱 |
svf 存谱
[Display] <Power>
wft2d (若出现
Scale outside boundaries:
输入
wc=150, wc2=150)
dconi, dpcon(20,1.2)
调色度
(浅色
2 格,<vs+20%>
或
<vs-20%>)
标定
(十字红线,
nl, rl(4.2p), rl1(61d)) |
|
打印 |
plhxcor(10,1.5,1,2) |
|
说明 |
|
|
mf(2,7) |
1. HETCOR 以
C 为主
(检测
C), 所以移动
C 谱参数,
再混和其它.
2. 习惯上第
7 区检测
HETCOR (或
HSQC, 二选一) |
|
j1xh |
aliphatic 120, aromatic 160,
一般未知 140 |
|
nt/ni 考虑 |
nt=16n, ni=128 或任意.
nt 值大好.
合理选择:
nt=16, ni=128 (~ 1.5 hr);
nt=32, ni=128 (~ 2.5 hr) |
|
处理谱图 |
大致类似 HSQC,
仍不能打
foldt |
|
标定 |
将十字线对齐某已知点 (如
C 70 ppm, H 3.81 ppm):
1 法:
rl(70p); rl1(3.81d)
若失败,
采 2
法.
2 法:
rl(3500), rl1(3.81d), 其中
3500 = 70x50 Hz, 即
70 ppm
* 注:
rl 表
F2 轴
(不一定为Y
轴),
rl1 表
F1 轴
. |
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打印 |
1. plhxcor(10,1.5,1,2): 10 ring,
间距
1.5, 1区H谱,
2区C谱
2. 简洁打印:
plhxcor (长形图),
plcosy (方形图) |
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备注 |
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HETCOR |
1. 大写HETCOR
为新版本;
小写
hetcor 为旧版本.
2. 为正相检测,
观察H检测C,
较费时
(因检测灵敏度较低的
C)
3. 目前多做
HSQC, 不大使用
HETCOR. 但仍有存在价值,
因绝不出错. |
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